L’esposizione si sviluppa in senso tematico.

Al primo piano la visita inizia con le opere d’arte sacra che raccontano il percorso di fede in Valdelsa, dalle origini alla nascita della Diocesi di Colle. Si continua con le sale dedicate alle collezioni civiche risalenti al XIX e al XX secolo, che custodiscono le opere dei pittori colligiani Antonio Salvetti e Walter Fusi.

Il percorso si conclude con la sezione dedicata alla Collezione di Romano Bilenchi, scrittore e intellettuale italiano tra i più importanti del secondo Dopoguerra. Tra le altre cose, è esposta una selezione della ricca biblioteca dello scrittore colligiano a cui si uniscono le opere di molti amici pittori che frequentavano i cenacoli fiorentini, tra cui Ottone Rosai, Moses Levy e Mino Ma.